B肝在研新藥REP 2139，抑製HBsAg分泌，作用機理繼續得到證明_HBeAg_mer_研究人員

公開日: 2021-12-29

在HEP DART 2021大會上，研究人員帶來了在研B肝新藥重要靶點之一，核酸聚合物（NAP）的研究進展。值得一提的是，目前REP 2139/REP 2165均是基於NAP的開發策略。

B肝在研新藥REP 2139，抑製HBsAg分泌，作用機理繼續得到證明

一、研究背景

研究人員介紹，核酸聚合物 (NAP) 抑製 HBV 亞病毒顆粒 (SVP) 的組裝和分泌，但不抑製 HBeAg 或 Dane 顆粒。這種寡核苷酸效應是由長度和硫代磷酸酯 (PS) 依賴性疏水相互作用驅動的，與序列或鹼基/糖修飾無關。 NAP 在發生 SVP 形態發生的 ER 後、高爾基體前囊泡 (ERGIC) 的酸化腔中起作用。

在 pH 7.4 的 HepG2.2.15 細胞裂解物中的差異 NAP 相互作用組篩選確定 HSP40 伴侶 DnaJB12 作為 NAP 抑製 SVP 組裝的假定宿主目標。DnaJB12 參與 SVP 組裝已通過 HepG2.2.15 細胞中的 DnaJB12 敲低抑製 HBsAg 但不抑製 HBeAg 分泌得到證實。對酸性 pH 下的 NAP 相互作用進行了持續分析，以檢查 ERGIC 內的生理相關結合活性。

來自：Replicor公司NAPs作用機理

展開全文

二、研究方法

在 pH 7.4 和 6.5 下對 HepG2.2.15 裂解物中的生物素化 NAP 進行 MS/MS 相互作用組分析。通過活性 REP 2139（40mer PS，疏水性）和 REP 2179（20mer PS）、REP 2147（40mer 磷酸二酯，非疏水性）和 REP 2031（40mer PS 聚C – 疏水但在酸性 pH 下通過均四聚作用滅活）。

通過蛋白質印跡證實了 shRNA 介導的 DNAJB12 敲低。通過 ELSIA 監測對 HBsAg（GS EIA 3.0，Biorad）和 HBeAg（ETI-EBK PLUS N0140，Diasorin）分泌的影響，並將其標準化為總細胞蛋白（如通過 BCA 測定確定）。

三、研究結果

先前確定的酪蛋白激酶 1D (CSNK1D) 的 shRNA 敲低抑製了 HBsAg 和 HBeAg 的分泌。在 pH 6.5 時觀察到 REP 2139:REP 2147 與 CSNK1D 相互作用的比率降低了 53 倍vs 7.4，表明疏水相互作用的喪失。此外，REP 2139 在 pH 6.5 下的 CSNK1D 相互作用與無活性的 REP 2031 相當。

相比之下，REP 2139 與 DNAJB12 的 REP 2139:REP 2147 相互作用在 pH 6.4 與 7.4 之間的比例增加了 40 倍，表明疏水相互作用增加。在酸性 pH 下，REP 2139 與 DNAJB12 的相互作用比 REP 2031 大 10 倍。 REP 2139 : REP 2179 比率在 pH 6.5 與 7.4 時與兩種靶標相比下降約 2 倍，表明具有相似的結合親和力。

之前 48 小時 shRNA 敲低 DNAJB12 導致分泌的 HBsAg 下降 40-50%。將此擊倒延長至 6 天可將分泌型 HBsAg 的抑製增加至 90%，這與 REP 2139 對 HBsAg 分泌的抑製作用一致。

四、研究結論

綜上所述，研究人員認為REP 2139 與 DNAJB12 的疏水性（抗病毒）相互作用在酸性 pH 值下強烈增強。這與酸化的 ERGIC 中 DNAJB12 的位置和 SVP 的組裝及其在 ERGIC 中被 NAP 的抑製一致。在 pH 6.5 時，NAPs 與胞質 CSNK1D 疏水相互作用的喪失與非生理相互作用和 CSNK1D 的敲低一致，驅動 HBeAg 的非生理抑製。

小番健康結語：我們也將此類化合物稱為B肝表面抗原抑製劑，HEP DART 2021大會上，研究人員進一步地證明核酸聚合物（NAP）可導致B肝表面抗原水準下降。返回搜狐，查看更多

責任編輯：