在開辟新的藥物發現途徑中，直接靶向B肝病毒cccDNA，消除或滅活cccDNA的能力，被全球科學家認為是功能性治愈HBV的“聖杯”。目前，一些完全滅活cccDNA的潛在有用工具是CRISPR-Cas9核酸內切酶系統，簡單介紹一下它。
B肝藥物發現途徑，靶向X蛋白，可能有助控制cccDNA轉錄
它能夠用於執行RNA引導的cccDNA破壞和誘變。CRISPR-Cas9核酸內切酶與合成的引導RNA（gRNA）複合，該RNA與cccDNA的靶序列完全匹配，從而切割了所選區域。因此，目前看來，想要使HBV cccDNA失活，就需要幾個靶向HBV基因組中多個不同位點的gRNA。而整合HBVDNA在CRISPR-Cas9介導的失活中也十分敏感，這可能導致宿主基因組的改變與隨後的基因功能異常。
這種編輯方法在臨床研究之前，實際上，還需要解決很多潛在問題。這些問題包括不完整的cccDNA降解，需要把CRISPR-Cas9系統轉移至所有感染的肝細胞和肝外細胞的遞送系統，潛在的脫靶效應，針對細菌酶的免疫反應可能引起嚴重的毒性以及編輯整合的染色體HBVDNA的不可預測效果。ZFN和TALEN，前期已有詳細介紹過。
ZFN，指的是鋅指核酸酶；TALEN，指的是轉錄激活因子樣效應子核酸酶。它們目前被認為是可以作為破壞HBV cccDNA的其他方法。這些方法可能會減慢抗藥性HBV株的生長，並增加病毒應答時間延長可能性。但是，這些方法也存在一定研究局限性，比如脫靶活性，對整合的HBVDNA影響以及免疫應答的潛在誘導障礙。
TALEN，它屬於目前全球新開發的核酸酶技術，可以裂解選定的DNA序列，從而導致基因破壞。全球已經開發了幾種類型的TALEN，它們靶向不同HBV基因型之間的病毒DNA保守區域。總體上看，TALEN相比較ZFN，具有更高的特異性靶向與滅活HBV基因組，並與IFN-α協同改善抗病毒活性。所以，這項技術也被科學界認為，它是提供了一種治療HBV感染的潛在策略。
還有一些新發現，也值得向各位讀者朋友介紹交流。例如，直接靶向HBV X蛋白，它可能是有助於控制cccDNA轉錄的另一種方法。HBx誘導Smc5/6複合體的蛋白酶體降解，這種複合體通常抑製cccDNA轉錄。因此，通過抑製HBx蛋白，將阻止現有cccDNA分子表達所有HBV轉錄物，並抑製新cccDNA分子形成。cccDNA的形成也可以直接用取代的磺酰胺靶向，而這些磺酰胺可以干擾rcDNA向cccDNA的轉化。
綜合來看，直接靶向cccDNA，促使cccDNA的永久滅活或降解的相關技術都已經在上方介紹。通過了解宿主酶（如TDP2，FEN1和Pol-K）在cccDNA形成中的作用，已有實現了破壞cccDNA的步驟。同樣，對病毒微型染色體形成和功能不可或缺的宿主細胞核組蛋白與染色質修飾酶的鑒定，也開辟了新的藥物發現途徑。返回搜狐，查看更多
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