HBV-反義寡核苷酸（ASO）當前全球只有兩家在研製中，分別是葛蘭素史克和臨床階段生物製藥公司（Aligos Therapeutics）。雖然，今年三月末Aligos已宣布終止B肝病毒反義寡核酸 ALG-020572（1期多次報告ALT突然升高，提示肝毒性），該公司繼續在動物實驗中，探索HBV ASOs分子。
B肝新型反義寡核酸，通過AAV-HBV模型，驗證三種結構新穎ASOs
在2022年歐肝會上（EASL2022），研究人員發表了一項題為：結合新型ASO化學物質後，顯著提高了AAV-HBV小鼠模型中HBV ASOs的效力和持久性。應用專有化學方法開發了同類最佳的HBV ASOs，即 ALG-020572 和 ALG-020576，它們都具有獨特的 N-乙酰半乳糖胺 4 (GalNac4) 偶聯物。
這些ASOs，分別針對小 HBsAg 和 HBx蛋白的開放閱讀框。這兩種ASOs均含有下一代螺環丙基橋接核酸 (scp BNA) 和核鹼基修飾單體，可降低肝毒性，同時在AAV-HBV小鼠模型中保持療效。
在這項研究中，研究人員進一步探索了 ALG-020572 和 ALG-020576序列中的其他 BNAs，例如胍橋核酸 (GuNA) 和其他專有的 BNAs，並進一步證明了它們可以在體外和體內改善並提高活性。實驗方法如下：
研究人員在 MerMade 12 與 MerMade 48 合成器上合成了具有LNA和第三代BNA化學成分的ASOs。採用 HBsAg 釋放法，在 HepG2.2.15 細胞或HBV感染原代人肝細胞（PHH）中進行體外篩選ASOs。使用AAV-HBV小鼠模型，通過分析小鼠的血漿 HBsAg 和 ALT 以測試 GalNAc-ASOs 的療效和對肝髒的毒性。
結果表明，發現階段的 ALG-021682 和 ALG-021639 是和 ALG-020572 定位相同位點的 GalNAc 4 偶聯ASOs。ALG-021682包含GuNA，而 ALG-021639 包含一個新型第三代BNA。在 HepG2.2.15 實驗中，未偶聯的 ALG-021682 的 EC50 比未偶聯的 ALG-020572 低 5倍。
在HBV感染PHH中，未綴合的 ALG-021639 比未綴合的 ALG-020572 效力高 5 倍。在AAV-HBV小鼠模型中，在單次皮下給藥 5mg/kg ALG-021682 和ALG-021639時，實現的B肝表面抗原最低值要比 ALG-020572類似物還低 2 倍。沒有一個ASO，顯示ALT升高。
最後，發現階段的 ALG-021618 是 ALG-020576衍生的一種結構新穎ASO。由於無法被 HepG2.2.15 細胞代謝處理，它在體外是無活性的。然而，在第0天、第3天和第7天重複給藥 3X10 mg/kg的 AAV-HBV 小鼠模型中，ALG-021618 實現的 HBsAg 最低值為 - 1.8 log10 IU/ml vs. ALG-020576 -1.2 log10 IU/ml。第60天，以 ALG-020576給藥的動物的 HBsAg 恢復到基線水準，但 以 ALG-021618給藥的動物，仍將 HBsAg 抑製 1 log10 IU/ml。
綜上所述，研究人員給出結論是：GuNA 和其他新型BNAs，改善了先導ASO ALG-020572的體外和體內活性。經過新修飾後的ALG-020576，顯著提高了對 HBsAg敲低的體內深度和持久性。結合這些化學物質的進一步研究正在進行中。
小番健康結語：隨著GSK836第2期中期積極數據公布，我們都想更多地了解反義寡核酸（ASO）。Aligos是全球另一家正在深入研究這一領域的製藥公司，本研究想要介紹的進展其實很簡單，即雖然HBV-ASOs-ALG-020572因對肝髒毒性在1期終止了，但在572的基礎上，繼續在動物實驗中探索更多新型ASOs分子，比如本研究中的 ALG-021682、 ALG-021639和 ALG-021618；
它們在AAV-HBV小鼠模型實驗中顯示，在抗病毒效力方向，特別是對B肝表面抗原調降作用方面明顯高於已經終止的ALG-020572。同時，以上三種早期階段的反義寡核苷酸，也沒有一種導致轉氨酶升高，即未見肝毒性。而 ALG-021682與ALG-021639是基於ALG-020572基礎上研發的，ALG-021618是基於ALG-020576基礎上開發的反義寡核酸。返回搜狐，查看更多
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