近期，小番健康持續介紹全球關於B肝病毒複製模板cccDNA的相關知識，因其長期穩定的存在肝細胞核中，也是導致日後再度激活的主要原因。全球科研人員，考慮到cccDNA在HBV生命周期中的重要性以及其在慢性B肝患者中的持久性，因而，有科學家提出需要更高效、準確的cccDNA定量方法。
B肝篩選針對cccDNA，改進藥物替代系統，尋找吸引力化合物
當然，研究B肝病毒cccDNA的生物學方向，在科學界一直存在挑戰性，主要原因是，cccDNA在感染的PHH、肝細胞和表達ncp的肝癌細胞株中拷貝數較低。目前，人們常用的cccDNA定量方法有Southern blotting和real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR)。雖然它們都一定的局限性，但傳統的Southern blotting定量法檢測和定量cccDNA，依然被全球主流認為是金標準。
由於這種定量法的成本高、工作流程繁瑣，因此Southern blotting在高通量篩選和臨床應用中受到限制。伴隨著實時定量PCR方法出現，這些限制已經被規避。相比傳統的Southern blotting定量法，實時定量PCR（real-time）更為省力、成本更低，而且可以更容易地進行高通量篩選。在一些情況下，可以使用先進的PCR方法檢測cccDNA的單個拷貝，例如液滴數字PCR (Droplet Digital PCR, ddPCR)。
這種實時熒光定量PCR雖然更敏感，但由於存在其他病毒DNA中間產物，如rcDNA、單鏈DNA（ssDNA）等，更容易出現假陽性錯誤，主要原因是與這些中間產物的豐度很高有關聯。因為上述原因，全球目前已經開發了幾種基於重組cccDNA（rcccDNA）的代理系統，並用於篩選抗HBV cccDNA藥物。介紹過目前全球篩選抗HBV cccDNA藥物的替代系統後，小番健康再介紹一下，全球開發這些針對cccDNA藥物替代系統的意義。
比如，開發藥物替代系統可以解決cccDNA，它是如何在感染細胞中調控和維持問題，有助於篩選針對cccDNA的靶向治療化合物；在不斷改進藥物替代系統過程中，一些新替代系統可以鑒定出抑製HBV cccDNA形成的化合物，突出rccccDNA技術在促進鑒定新型cccDNA靶向藥物方面的潛力等。目前，雖然全球已有能力生成cccDNA，但這些方法生成的cccDNA拷貝數偏低，主要原因可能是由於重組效率低導致的，並因此限制了這些方法的廣泛使用。
目前，利用DNA微環技術，生成的一種新的rccccDNA，全球將其命名為HBVcircle。HBVcircle DNA不是在肝細胞體內形成的cccDNA，而是通過整合酶介導的分子內重組在大腸杆菌中，形成並提取的。全球科研人員通過這種方法，生成的cccDNA除了在重組位點有一個短的attR序列外，並不包含細菌主乾，這對於病毒複製沒有影響。
所以，這使得rccccDNA在轉染入細胞後，可以很好地模擬未修飾的HBV cccDNA。目前看來，這是有益的，因為含有細菌主乾的HBV質粒的cccDNA的轉錄，被證明在細胞中被迅速抑製。另外，當與高斯熒光素酶報告基因結合時，可以方便地通過發光檢測rccccDNA的表達，從而為篩選針對cccDNA的治療藥物，提供一種具有吸引力的選擇。以上就是全球基於通過改進篩選抗HBV cccDNA藥物替代系統，從而尋找一些有吸引力治療化合物方向所做的工作。返回搜狐，查看更多
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