B肝新型化合物TL020，CADA類似物，評價抗HBV活性及對蛋白質影響_細胞_研究人員_水準

二、研究方法

採用不同濃度的TL020處理表達HBV病毒粒子的HepG2.2.15 細胞 4 天，然後使用Southern blot技術檢測量化HBVDNA的水準。中性紅吸收被用來量化毒性。使用20 μM 的 TL020 處理 HepG2 細胞 48 小時，確定其對細胞蛋白質水準的影響。細胞在RIPA緩衝液中裂解，細胞碎片通過離心分離。使用胰酶消化蛋白質，並通過 LC-MS/MS 進行分析。或者在裂解後，用離心柱分離 RNA 並反轉錄為 cDNA。使用 SYBR Green 染料，進行qPCR檢測來確定轉錄水準。

三、研究結果

結果表明，在最初的篩選中，TL020在降低HBV DNA水準方面非常有效。將HBV DNA水準降低50% (EC50)或90% (EC90)所需的濃度分別測定細胞內和排出的病毒粒子。對於排出的病毒粒子的EC50在0.49 ~ 0.63 μM之間，EC90在1.2 ~ 1.6 μM之間。對於細胞內HBVDNA，EC50為1.2 μM, EC90為5.9 μM。

這些值遠低於將細胞活力降低 50% (CC50) 所需的濃度，該濃度介於 38 至 53 μM 之間。使用LC-MS/MS觀察TL020對HepG2細胞的影響，結果揭示了在檢測到的4680個蛋白質中，有385個基因的蛋白質水準存在顯著差異。通路分析顯示，ECM 受體相互作用、內質網中的蛋白質加工、膽汁分泌、丙酮酸代謝和代謝通路受到最顯著的影響。

在考慮干擾共翻譯易位的機制時，有30種蛋白質的子集被下調，並包含共翻譯易位所需的信號肽。通過 qRT-PCR 分析，發現了18種蛋白質，其mRNA水準要麽穩定要麽升高，表明其具有轉錄後機制。

四、研究結論

綜上所述，在這項TL020對宿主蛋白表達影響的研究表明，這種類似物的特異性可能不如CADA。大多數下調的蛋白質列表被富含信號肽的蛋白質。有必要進行後續研究，以確定所提出的機制直接靶向哪些蛋白質，並確定哪些蛋白質影響HBV複製。本研究中的介紹工作，對於進一步研究蛋白質的優先排序很有用。

五、核心觀點梳理

小番健康結語：我們簡單梳理一下，研究人員的核心觀點。現有慢B肝療法還無法實現較高的功能性治愈率（包括核苷類似物或干擾素），未來採用聯合用藥將在改善慢B肝進程方面起著重要作用。全球正有許多新機制候選藥物進入B肝的臨床研究中，其中，觀察到環三氮二磺酰胺(CADA)及其類似物在抗多種病毒方面具有活性。

體外研究中，CADA類似物TL020已被證明能有效抑製B肝病毒複製，並對細胞活力影響最小。CADA的作用機理主要表現在干擾特定蛋白質的的共翻譯易位，這種干擾機制表現出開發新藥物的潛力，在本研究中，研究人員主要評估了CADA類似物TL020和它對蛋白質表達的影響，評估的結果有助於闡明抗疫啊功能病毒活性的機制。返回搜狐，查看更多