比利時魯汶大學幹細胞研究所研究人員介紹，全球約有3億人慢性感染HBV。儘管NRTls療法是高效的，由於cccDNA保留在肝細胞核中，導致NRTls需終身用藥。因此，迫切需要能夠治愈HBV而不是控制疾病的方法。
圖 1. HC3x hPSC 向 HLC 分化並表達高水準的肝細胞標誌物和 HBV 進入受體 NTCP
B肝HC3X-AA-HLC模型，比利時科學家開發，新型藥物篩選工具
PHH 目前是體外HBV研究的金標準，但它們也有缺點，全球還需要替代HBV研究的方法。研究人員最近在Biomedicines上發表了一項科學研究，使用hPSC-HLC作為體外HBV感染模型。創建了過表達三種轉錄因子（HC3x hPSC；HNF1α、PROX1 和 FOXA3）的hPSC 系，當在代謝優化的培養基條件（含有高水準的氨基酸混合物（AA））中培養時，產生更成熟的肝細胞後代增加藥物代謝能力，以及改善細胞代謝，即能量代謝和糖異生的氧化磷酸化，而不是糖酵解，以及氨基酸劑量依賴性改善藥物生物轉化能量。
在本研究中，研究人員測試了這些代謝改善的HC3x-AA-HLC是否可以用作HBV體外感染模型。研究結果證明了HC3x-AA-HLC從分化的第16天開始就表達高水準的HBV進入受體NTCP，並且Atto488標記的myrB（一種HBV包膜蛋白衍生的脂肽）可以結合細胞上表達的NTCP HC3x-AA-HLCs的表面。一致的，HC3x-AA-HLCs可以有效地以劑量依賴性方式感染HBV。這通過HBcAg和HBsAg的免疫熒光染色顯示。
圖 2. HC3x-AA-HLC 易受 HBV 感染，能夠支持 HBV 複製和新型傳染性 HBV 病毒粒子的產生
此外，HBsAg和 HBeAg在 HLC上清液中分泌，隨著時間推移而增加，這表明在HBV感染的HC3x-AA-HLC中形成了功能性cccDNA。與這一觀察結果一致，對HepG2-NTCP細胞的再感染和回滴研究表明，HBV感染的HC3x-AA-HLCs產生了新的傳染性HBV病毒粒子，表明形成了cccDNA。然而，必需通過qPCR或Southern印跡對cccDNA進行定量，以進一步確認cccDNA在HBV感染的HC3x-AA-HLC中的存在和擴增。
圖 3. HC3x-AA-HLC 與已知的抗 HBV 抗病毒藥物拉米夫定的驗證
用拉米夫定處理HBV感染的HC3x-AA-HLCs阻斷了新的HBV病毒顆粒產生，表明在未經處理的HBV感染的HC3x-AA-HLCs的上清液中檢測到的感染性顆粒是新產生的HBV感染性顆粒，而不是來源於最初HBV接種物。基於未處理的HBV感染的HC3x-AA-HLCs上清液中HBc+細胞百分比和HBs水準增加，這些結果表明該體外模型支持HBV病毒隨時間傳播，這一特徵尚未得到證實。在HBV感染的HepG2-NTCP細胞中觀察到。因此，HC3x-AA-HLCs可用作研究HBV生命周期和病毒傳播的體外工具。
HC3X-AA-HLC 模型還可以正確識別HBV進入抑製劑myrcludex B和核苷類似物拉米夫定的抗病毒作用。使用myrcludex B治療後，研究人員觀察到HC3x-AA-HLC 模型中的HBV感染顯著減少！
小番健康結語：我們梳理一下，比利時魯汶大學幹細胞研究所發表的這項科研進展。核苷（酸）病毒聚合酶抑製劑上市已久，它們可以有效治療慢性HBV，但是由於共價閉合環狀DNA（cccDNA）在肝細胞核中持續存在，因此這些病毒聚合酶抑製劑通常需要終身使用。全球迫切需要開發能夠從肝細胞核中消除cccDNA的新療法。
以往全球的B肝病毒體外研究通常是使用原代人肝細胞（PHH），但是這種方法因供體器官短缺而迫切需要替代品。正在探索人類多能幹細胞（hPSC）衍生的肝細胞樣細胞（HLC）作為新的HBV體外感染模型。在本研究中，證明了HBV可以有效感染HC3x-AA-HLC，檢測到B肝表面抗原與B肝核心抗原釋放顯著增加！
研究人員最後還使用核苷（酸）逆轉錄酶抑製劑拉米夫定與病毒進入抑製劑Myrcludex B來驗證了HC3x-AA-HLC 模型，結果證明這種模型可用於抗病毒藥物研究！研究以代謝改善的幹細胞衍生的幹細胞樣細胞支持HBV生命周期，是HBV研究核抗病毒藥物篩選的有前途工具為題，發表在Biomedicines上。總而言之，HC3x-AA-HLC模型在今後篩選新型B肝抗病毒藥物都是很有意義的。返回搜狐，查看更多
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