B肝藥化前沿，上海恆瑞醫藥科學家發現，新型高效化合物SHR5133_研究_動物_進行

衣殼組裝調節劑（CpAM）代表了一類新的B肝抗病毒藥物，上海恆瑞醫藥科學家發現了一種化合物名為SHR5133，它是一種高效的新型HBV衣殼組裝調節劑，並將化合物合成和臨床前開發結論發表在ACS Medicinal Chemistry Letters。

B肝藥化前沿，上海恆瑞醫藥科學家發現，新型高效化合物SHR5133

藥物發現過程十分重要，一種新化合物從發現到動物實驗也要過許多關。在體外抗HBV活性試驗中，HepG2.2.15是一種穩定表達的B肝病毒人肝母細胞瘤。病毒含有HBVDNA的顆粒可以在細胞內通過複製、轉錄和包裹化產生，然後分泌出來。

本研究的化合物被認為通過阻止HBV衣殼蛋白的組裝來抑製HBV複製。研究人員通過定量PCR對HepG2.2.15細胞釋放的HBVDNA進行定量分析，確定了化合物的抗HBV活性。HBVDNA定量是通過QIAamp 96 DNA QIAcube HT Kit (Qiagen) 和 Qiagen提取HBVDNA根據製造商的說明進行自動DNA提取裝置。

來自ACS Medicinal Chemistry Letters

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對HepG2細胞的細胞毒性作用方面，研究人員將細胞以6,000 個細胞/孔接種到 96 孔板上，並在 37°C、5% CO2 下孵育 16-20 小時。第 2 天，化合物在 DMSO 中溶解至 20mM，並在 DMSO 中進行 3 倍 8 點系列稀釋，起始濃度為 2mM。然後將化合物的系列稀釋液在細胞培養基中稀釋 200 倍，最終 DMSO 為 0.5%。吸出培養基並將200μl具有系列稀釋化合物的培養基添加到每個孔中。

用 0.5% DMSO 處理的細胞用作陰性對照。將板在 37°C、5% CO2 下孵育 72 小時。第 5 天，根據製造商的說明通過向每個孔中添加 CellTiter Glo 來檢測細胞活力，並在酶標儀（PerkinElmer）中檢測發光信號。 CC50定義為細胞毒作用達到50%時的濃度，採用四參數Logistic非線性回歸擬合計算。

AAV-HBV感染小鼠模型的體內功效試驗方面，體內藥效試驗在徠博科醫藥研發(北京)有限公司上海分公司進行。所有本研究中的程序符合當地動物福利立法、Covance 全球政策和程序以及《實驗動物護理和使用指南》。

4-5周齡的雄性 C57BL/6 小鼠在到達後在動物設施中適應 10 天。在第-28天，所有動物通過尾靜脈（IV）注射1×1011 AAV-HBV載體基因組（在200μL PBS中）以建立模型。每天監測動物臨床體征並在第-38、-28和-7天測量體重。在第-7 天（AAV-HBV 注射後 21 天），在麻醉下通過眶後竇收集血樣用於基線病毒載量分析。

第-1天（第一次給藥前一天），根據第-7天的血清HBV DNA、HBsAg和HBeAg水準以及體重，將HBV感染小鼠隨機分為6組，每組6只動物，用於化合物治療。 NVR-3778 400 mg/kg（第 02 組）、SHR5133 3 ~ 30 mg/kg（第 03 ~ 05 組）和 JNJ-379 10 mg/kg（第 06 組）通過口服管飼法以 20 mL/kg 每天兩次給藥。第0～28天。每天監測動物臨床症狀。每周兩次測量體重以計算劑量。在第 0、3、7、10、14、17、21、24 和 28 天（每隻小鼠 15 μL）給藥之前，在給藥前每周兩次從所有小鼠收集血樣用於血清製備。第28天，對小鼠實施安樂死，收集血清和肝組織並冷凍。

如上所述通過HBV DNA定量PCR測定血清病毒載量。將血清用無菌生理鹽水稀釋 500 倍，並根據製造商的說明使用 HBeAG ELISA KIT 或 HBsAG ELISA KIT (Autobio) 進行 HBeAG 或 HBsAG 測量。

小番健康結語：在本研究中，上海恆瑞醫藥科學家通過藥效團探索發現了一種以稠合雜環酰胺為特徵的新型化學型。鉛優化導致化合物 8 的 EC50 值為 511 nM，然後發現呱嗪上的甲基取代顯著提高了體外效力。進一步的SAR研究確定了關鍵化合物 SHR5133，它顯示出體外高抗病毒效力、良好的跨物種藥代動力學特徵和體內強大功效。

在ACS Medicinal Chemistry Letters上，恆瑞醫藥科研人員表示，衣殼組裝調節劑通過靶向B肝病毒（HBV）的核心蛋白以破壞組裝過程。本研究發現了一種新型高效的衣殼組裝調節劑，即SHR5133！有關SHR5133的藥物合成過程，在此已省略，僅科普藥物發現的臨床前試驗方法和結論，業內人士也將衣殼組裝調節劑稱為核心蛋白變構調節劑。返回搜狐，查看更多

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