摘要 本課題主要對桑葉提取物的抑菌活性進行了研究，包括抑菌譜及最低抑菌濃度的確定，優化抑菌活性物質的提取工藝，探討了抑菌活性物質的穩定性並進一步對抑菌活性 物質進行分離純化和成分粗測。最後對桑葉提取物作了一些應用研究。 將桑葉用水和７０％乙醇分別提取後，用濾紙片法和平板計數法進行抑菌實驗，得到 抗菌譜。採用線性回歸法快速準確的得出它們對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最低抑菌 濃度。乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的ＭＩＣ：０．４３％，對大腸桿菌的ＭＩＣ：０．０５５％；桑 葉水提取物對金黃色葡萄球菌的ＭＩＣ：Ｏ．８６％；對大腸桿菌的ＭＩＣ：１．５４％。可見桑葉 乙醇提取物對兩種代表性細菌的抑菌效果優於水提取物。 採用單因素實驗確定桑葉抑菌活性物質提取最佳條件為：乙醇濃度７０％（Ｖ／Ｖ）、 提取溫度７０。Ｃ、提取時間４ｈ、液料比（Ｗ／Ｖ）１：３０。採用正交實驗，得出最佳工藝條 件為乙醇濃度７０％，提取溫度７０。Ｃ，提取時間６ｈ，液料比ｌ：４０。此條件下，桑葉提 取物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為８．８１ｍｍ。 對桑葉提取物抑菌活性做了穩定性測試，結果表明桑葉提取物的抑菌活性具有較好 的熱穩定性，對紫外光照射穩定。對菌體的抑製能力隨ｐＨ值的升高而有所下降，其中 酸性條件下抑菌活性較強，在ｐＨ６．７之間，緩衝液對提取物的抑菌活性沒有影響，並且 提取物的抑菌效果好。 對活性物質進一步分析，首先將桑葉提取物分為石油醚部、二氯甲烷部、乙酸乙酯 部、正丁醇部和水部等不同極性溶劑萃取物，經抑菌活性比較，確定乙酸乙酯部的抑菌 活性最強，正丁醇部次之。乙酸乙酯部經薄層層析，展開後，有多個斑點，用１％的Ａ１Ｃ１３ 顯色，多個點顯示黃色，紫外燈光下顯黃綠色和棕色。推斷抑菌組分屬於黃酮類化合物。 乙酸乙酯部分上聚醯胺和矽膠柱分離，得到抑菌效果最好的組分，薄層層析，發現 三個清晰的斑點，Ｒｆ值分別Ｏ．２０，Ｏ．２７，０．７２。桑黃素的Ｒｆ值為０．２７，通過ＨＰＬＣ驗證桑 黃素是桑葉抑菌有效成分之一。 把桑葉提取物加入到化妝品中作測試，結果表明桑葉提取物具有很好的防腐、美白、 保濕效果，可以在化妝品中廣泛應用。 關鍵詞：桑葉：防腐劑；提取；抑菌活性；分離；化妝品；美白；保濕;
第一章綜述第一章綜述 前言 化妝品的使用具有非常久遠的歷史，並且伴隨著人類自身的存在和發展而流傳至今 考古學家們相信，人類自舊石器時代即己開始使用化妝品，這一時期大約自５萬年前開始。人類早期使用的化妝品大多數都是天然礦物質，這些物質本身就有抗菌能力， 不存在防腐問題。隨著科學技術的發展，產生了現代化妝品工業，化妝品走進了千家萬 戶，其原料也不再局限於天然物質。為了使化妝品在保存期限內及在消費者使用期內不發 生微生物汙染，各種化妝品必然要添加一定的防腐劑。 調查表明，儘管大多數到消費者手中的化妝品處於良好的微生物狀態，但它們不能 經受在使用過程中帶入產品中的大量微生物。可是在日常生活中，無論是恬靜的家居， 還是各種社交聚會；無論是穿越大街小巷，還是沐浴在大自然中，人們總是被各種各樣 的微生物包圍著，其中很多是致腐性微生物，正是這些微生物造成了對化妝品的汙染。 汙染性微生物通過各種各樣的水解酶使化妝品的原料產生代謝作用，從而引起氣味、色 澤、粘度等向不利的方向轉化。儘管大多數是致腐性微生物，也有一些會侵入人的肌膚 並表現為對健康的危害，被汙染的浴液引起皮膚感染，防腐不良的眼部化妝品會引起眼 部疾患。 哪裡有水存在，哪裡就有生命，不考慮溫度、ｐＨ值或其他環境因素，只要水 以液體形式存在，就會有微生物生活在其中。因此，防腐的核心就是選擇適當的防腐劑 加入到化妝品中，有效地抑製化妝品中的微生物的生長和繁衍。
１引言 造成化妝品不穩定的一個主要因素就是微生物，由於化妝品中的原料、添加劑中含 有大量的營養物質和水分，其中大部分是微生物生長、繁殖所必需的碳源、氮源和水， 在環境適宜的情況下，微生物在化妝品中將會大量生長繁殖，吸收、分解和破壞化妝品 中的有效成分。受到微生物作用的化妝品就會發生變質、發霉和腐敗。化妝品的變質不 僅會導致色、香、味發生變化，品質下降，而且變質時分解的組織會對皮膚產生刺激作 用，繁殖的病原菌還會引起人體疾病。
２化妝品的變質和防腐劑的研究現狀 ２．１防腐劑的抑菌機理，所謂防腐ＮＥ４』５１是用微量的劑量加入成品後，對產品的各項指標均無不利影響，對 人及環境符合衛生標準，而能使產品在規定時間內保持不受霉變的物品。合格的防腐 劑，它首先是有足夠的殺滅和抑製各類微生物的能力；其次有極高的安全係數，要求 無毒，無刺激，無皮膚過敏；再其次添加量必須是微量（化妝品中一般添加量是萬分 江南大學碩士學位論文 之幾）有殺菌力的東西成千上萬，但同時具備以上３個條件成為化妝品專用防腐劑的 目前經常使用的僅十多種。現在消費者關心的就是無毒，無刺激，無皮膚過敏問題。 防腐劑對微生物的作用在於它能選擇性地作用於微生物新陳代謝的某個環節，使 其生長受到抑製或致死，而對人體細胞無害。
２．１．１抑製微生物細胞壁的形成 防腐劑抑製微生物細胞壁的形成是通過阻礙形成細胞壁的物質的合成來實現，如有 的防腐劑可抑製構成細胞壁的重要組分肽聚糖的合成，有的可阻礙細胞壁中甲殼質的合 成，有的則破壞細胞壁的結構，使細胞破裂或失去其保護作用，從而抑製微生物生長以 至死亡。
２．１．２影響細胞膜的功能 防腐劑破壞細胞膜，可使細胞呼吸窒息和新陳代謝紊亂，損傷的細胞膜導致細胞物 質的泄漏而使微生物致死。如苯甲醇、苯甲酸、水楊酸等物質，通過損害了正常細胞的 蛋白質結構而使細菌死亡。
２．１．３抑製蛋白質合成和致使蛋白質改性 防腐劑在透過細胞膜後與細胞內的酶或蛋白質發生作用，通過干擾蛋白質的合成或 使之變性，致使細菌死亡。如鏈黴素等由於對細菌具有干擾其蛋白質合成作用，成為一 種優良的抗生素。如硼酸、山梨酸等的作用，可使細胞內蛋白質變性，醇類、醛類易使 蛋白質凝固沉澱，而具有抗菌的作用。
２．２化妝品中微生物的檢測 微生物無論在未使用過的還是正在使用的化妝品中都存在。化妝品中分離出的常見 微生物菌群有細菌（包括革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌）如大腸埃希氏菌、假單胞菌，霉 菌如黑麴黴、青黴，酵母菌如假絲酵母、白色念珠菌等睜１０ｌ。其中有些菌群對人體無害， 而有些菌群如金黃色葡萄球菌（Ｓｈａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、綠膿桿菌（Ｐｓｃｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ） 等，對人體有極大的危害。 目前各國對醫藥品和化妝品的微生物學評定尚無統一的標準。一般說來，對嬰兒用 品及眼用醫藥品、化妝品的規定標準較嚴。我國化妝品衛生標準ＧＢ７９１６—８７規定，化妝 品菌落總數不得超過１０００ｃｆｕ／ｍＬ（ｇ），眼部、１２１腔黏膜用品及嬰兒、兒童用品不得超過 ５００ｃｆｕ／ｍＬ（ｇ），黴菌和酵母菌不得超過ｌＯＯｃｆｕ／ｍＬ（ｇ），綠膿桿菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、金黃色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ鋤ｒ飢ｓ）等有害菌群不得檢出。
２．３影響化妝品防腐活性的因素 防腐劑的作用效果與很多因素有關，在一種體系中具有高效防腐作用的防腐劑在另 一種體系中也許毫無效果。因為在某個配方體系中，會有多個因素使防腐劑失效。下面 第一章綜述列舉了影響防腐劑效果的幾種主要因素『２—１１： （１）ｐＨ的影響 ｐＨ值的改變影響有機酸防腐劑的離解從而影響防腐劑的活性，ｐＨ的改變也會改 變防腐劑的活性。另外，懸浮液中不溶解固體ｐＨ的影響也會使那些對ｐＨ敏感的防 腐劑失效。 （２）固體粒子及凝膠的影響 一些化妝品含有高嶺土、矽酸鋁鎂等粉質粒子，能夠吸附防腐劑，造成防腐劑的 活性損失。但有的吸附劑在吸附防腐劑的同時也吸附其中的細菌，使其置於高濃度防 腐劑中強化其抑菌效果。防腐劑與水溶性高分子凝膠的結合，使配方中遊離的防 腐劑濃度降低從而降低其效能。 （３）非離子表面活性劑加溶作用的影響陋 化妝品中的各類表面活性劑，尤其是非離子表面活性劑與防腐劑之間會形成加溶 ．絡合作用而影響到防腐劑的活性。油溶性的非離子表面活性劑（ＨＬＢ＝３—６１對防腐劑的 失活作用要比ＨＬＢ值高的水溶性非離子表面活性劑大。 由於體系中遊離防腐劑濃度 變小而降低了防腐劑的活性，因此在一些非離子表面活性劑體系中，要保持原有的防 腐作用，應適當增加防腐劑的用量。 （４）防腐劑變質的影響 有些因素會影響防腐劑自身的變質從而降低防腐效果。如光照，加熱等引起防 腐劑分解，化學和生化反應引起的失效，或者輻射消毒滅菌過程中引起損失等等。 （５）其他作用 此外，防腐劑在油水兩相中的分配，包裝容器及香精、螯合劑的存在，都會不同程 度地影響防腐劑的活性。
２．４防腐劑所需要具備的條件 用量少、抗菌範圍廣的單一防腐劑是不存在的。但是，設想一個「理想」的防腐劑 標準對於我們研究開發一個高效廣譜的防腐體系具有重要意義。我們認為，一個 好的防腐劑至少應該滿足下面的條件： （１）具有良好的抑菌性能，不僅抗細菌，而且抗真菌（黴菌和酵母菌）。 （２）用量很少即可取得較好的抑菌效果。 （３）在廣泛的ｐＨ範圍內有效。 （４）安全性好，沒有毒性和刺激性。 （５）化學惰性，不與配方中其他成分及包裝材料反應。 （６）具有合適的油水相分配係數，使其在產品水相中達到有效的防腐濃度。 （７）與大多數原料相容，不改變最終產品的顏色和香味。（８）使用成本低，容易獲得。
２．５防腐劑的有效性評價標準 化妝品防腐體系功效性評價（ＰＥＴ）方法〔２１五３】，防腐劑體系有效性的評價，不同的國 家使用了幾種不同的ＰＥＴ方法，包括美國藥典（ＵＳＰ）法、英國藥典（ＢＰ）法和歐洲藥典 （ＥＰ）法。１９９５年時，為協調歐洲國家的測試方法，ＢＰ經修訂與ＥＰ一致。美國化妝、盥洗 和香精聯合會（ＣＴＦＡ）也有自己的測試方法（簡稱ＣＴＦＡ法阱．２６ｊ）。ＵＳＰ法和ＣＴＦＡ法都 是標準方法。另外還有一些快速測試程式，如線性回歸法、 加速防腐作用測試法和假 定激發法。這幾種方法的實驗過程都很相似，但樣品分析所需的時間和有效性判斷的標 準不同。這些不同之處可導致測試結果的變化以及某產品是否能通過激發測試。
２．５．１ＵＳＰ法【２７２８】 （１）激發實驗用微生物 金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黑麴黴菌。 （２）微生物接種濃度 微生物接種濃度為１．０ｘ１０５＿１．０ｘ１０６ｅｆｕ／ｍＬ（曲 （３）取樣測定的時間程式 取樣測定的時間程式為接種後的０，７，１４，２１和２８天取樣測定評估。 （４）有效性的標準 在第１４天，活細菌濃度減少９９．９％以上； 前１４天酵母菌和黴菌濃度維持或低於 原接種濃度；在２８天試驗期，每次取樣濃度保持或低於要求的濃度。 （５）試驗手續 ｌ，實驗用接種物（菌液）的製備 應選用純菌種作為實驗用菌株。實驗前，應以新鮮斜面培養物分別接種在蛋白腖 瓊脂或普通肉湯瓊脂斜面培養基上，於３０—３７０Ｃ培養２４小時；用生理鹽水將培養物稀 釋到每毫升含菌數約ｌｘｌ０８個。各實驗用的酵母菌和黴菌，應以新鮮斜面培養物分別 接種在沙氏瓊脂或改良馬丁瓊脂培養基斜面上。黑麴黴在２０．２８０Ｃ培養７天，用生理 鹽水稀釋到每毫升約ｌｘｌ０８的孢子的菌懸浮液。 ２，培養基 應選擇最適於各實驗菌株生長的培養基。如對細菌一般可用蛋白腖瓊脂培養 基．普通肉湯培養基，對酵母和黴菌可用沙氏瓊脂培養基、改良馬丁培養基、察氏瓊 脂培養基。也可選用其他適於這些菌生長繁殖良好的培養基。 ３，實驗操作 用合適大小帶塞的消毒的試管取５份試樣，每份２０ｍＬ；按Ｏ．１ｍｌ接種物／２０ｍＬ 試樣相同的比例將每份試樣接種。使接種後試液的微生物濃度為ｌｘｌｏｓ－ｌｘｌ０６ｅｆｕ／ｍＬ（ｇ） 試液。測定接種後每份試樣的微生物數，計算出每毫升微生物的個數，作為試樣微生 物起始濃度。接種後試樣在２０．２８。Ｃ進行培養（或在指定的溫度下培養）。在接種後７、 １４、２ｌ、２８天后，用平板菌落計數法測定試樣的活的生物數，記錄其外觀的變化，以 第一章綜述各式樣開始時微生物的濃度作為理論濃度，計算每種微生物變化的百分率。根據上訴 標準評估防腐劑的有效性。
２．５．２Ｄ值計演算法 Ｏｙｔｈ等１２９－３１】提出使用試驗微生物菌群減少一個十進位所需的時間（ｄｅｃｉｍａｌ．ｒｃｄｕ硎ｏｎ） 來評估防腐劑的有效性，即試驗微生物菌群減少一個對數部門所需的時間，簡稱為Ｄ值。 Ｄ值定義為防腐劑接觸的微生物菌群９０％失活所需的時間。Ｄ值可以由接種提取物後， 得出培養物的對數死亡速率，通過作圖法或電腦線性回歸法計算。 將接種樣品存活的微生物數的對數對取樣時間作圖。菌液濃度範圍是１０—８．ＯＯｘｌ０６ ＣＦＵ／ｍＬ，作圖時縱坐標是菌液濃度的對數，橫坐標是時間。由此作得細菌的存活曲線。 Ｏｒｔｈ〔３２１等證實：在大多數試驗中，細菌ＣＦＵ＝０，與時間相交，得到直線在橫軸的截距， 設為ｘ。截距ｘ代表在試樣中菌種完全失活的時間，Ｄ值可由曲線的斜率求得（斜率的 負倒數）。Ｄ值越小，表示微生物菌群９０％失活所需的時間越短，防腐效果越明顯。 有效性標準：美國藥典（ＵＳＰ）有效性標準換算成Ｄ值，細菌的Ｄ＜１１２；ＣＴＦＡ法的 有效性標準換算成Ｄ值，細菌Ｄ＜５６。線性回歸法，致病菌Ｄ＜４，非致病菌Ｄ＜２８。它 比前兩種的標準都要嚴格，所以滿足線性法條件的遠遠滿足前兩種的標準。 ２．６防腐劑的種類 根據美國ＦＤＡ和ＣＴＦＡ的出版物報導，化妝品允許使用的化學防腐劑約有１１０—１２０ 種，其中化合物４０種，衍生物２０．３０的種，復方防腐劑約５０種，我國（化妝品衛生標準） 中對６６種防腐劑在化妝品組份中限制了含量和使用生產化妝品的種類及條件。但隨著 化妝品生產量的增長和品種的不斷變化，防腐劑的使用也在不斷改變。傳統的防腐劑一 般為有機酸或其鈉鹽類、醇、醛、酚、酯及有機汞等，現已較少使用。目前化妝品 防腐劑使用最多的是對羥基苯甲酸酯類（尼泊金酯類），氨基酸類衍生物作為一類較新 的防腐劑逐漸被應用。 （１）對羥基苯甲酸酯類。１（尼泊金酯類） 對羥基苯甲酸酯類防腐劑是目前圍內外使用最多、較為安全的化妝品防腐劑，常用 的有尼泊金甲酯、乙酯、丙酯三種，丁酯和苄酯較少使用，其中使用最多的是甲酯，丙 酯次之，通常將兩者混合使用，可以增加防腐效果。此類防腐劑通用性強，可用於膏霜、 洗面乳、粉餅、洗髮精等化妝品中，在產品中用量一般為０．２％。我國《化妝品衛生標準》 中最大允許使用濃度：混合酯０．８％（以酸計），單一酯０．４％（以酸計）。 （２）咪唑烷基脲（Ｇｅｒｍａｌｌ１１５）ｔ４０ＡＩ〕 ８０年代由美國研製出新型的防腐劑一Ｇｅｒｍａｌｌ，此類防腐劑的使用也較為普遍。在 美國１９８７～１９９６年ＦＤＡ登記的化妝品工業常用防腐劑中約佔１０％，其性能較好，具有 更好的活性，是一類前景良好的防腐劑。我國目前已能生產ＪＭ系列防腐劑。其主要成 份是咪唑烷基脲及其衍生物．為許多化妝品所使用．其用量一般為０．２％．０．６％。我國《化 江南大學碩士學位論文 妝品衛生標準》中最大允許濃度為０．６％，該類防腐劑多應用於膏霜、洗面乳、粉霜、 眼用化妝品中。 （３）卡松（ＫａｔｈｏｎＣＧ）ｔ４３刪 卡松是５一氯一２一甲基一４一異噻唑．３．酮和２．甲基４異噻唑．３一酮的混合物，是一類用量少 又高效、較常用的化妝品防腐劑。白１９７８年開始由美國引用，一般使用濃度為０．０２％．０．１％ 可廣泛用於水溶性化妝品如膏霜、洗面乳、洗髮精、護髮素、沐浴液等，目前已代替甲醛、 季銨．１５、山梨酸等，是發用產品首選的防腐劑。由於其成本低，國內外不少廠家用它 來代替尼泊金酯類防腐劑，它的應用將會不斷擴大。但由於其安全性問題，在歐洲的使 用略有下降。 （４）羥甲基二甲基乙內醯脲（ＤＭＤＭｈｙｄａｎｔｏｉｎ）ｔ４０４５４６】 該防腐劑的商品名為Ｇｌｙｄａｎｔ，又名ＤＭＤＭ海因，它是靠緩慢釋放甲醛來防止化妝 品微生物汙染，比甲醛安全，具有較廣泛的殺菌作用。一般使用濃度為０．０５％一０．５％，多 用於洗髮洗髮精等用後要沖洗掉的產品中。 （５）３－碘一２－丙炔基一丁氨基甲酸酯（Ｉｏｄｏｐｒｏｐｙｎｙｌｂｕｔｙｌｃａｒｂａｍａｔｅ ＩＰＢＣ） ＩＰＢＣ為氨基酸類衍生物，是一種較為新型的化妝品用防腐劑。美國ＦＤＡ登記使用 的化妝品防腐劑中，於１９９６年才開始有登記使用它在防霉、殺真菌方面比其它化妝品防 腐劑的效果好，常與其它防腐劑復配使用，如與雙咪唑烷基脲復配成ＧｅｒｍａｌｌＰｌｕｓ或與 ＤＭＤＭ ｈｙ－ｄａｎｔｏｉｎ復配成Ｇｌｙｄａｎｔ Ｐｌｕｓ，一般使用濃度為０．１％．１．Ｏ％。 ３天然植物防腐劑的利用
３．１植物抑菌活性物質的種類與性質 從植物中開發天然防腐劑已成為當前研究的熱點Ｍ．大量研究發現。５２１多種天然 物質如大蒜、蘆薈、茶葉等的提取物具有不同程度的抑菌作用，與傳統的化學防腐劑相 比，這類天然防腐劑物質來源廣泛，加工低廉。目前，國內外對於中草藥中防腐抑菌成 分的提取、篩選、抑菌性能和抑菌機理進行了大量試驗研列。Ｄ．Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ〔５５１等對 印度的５０種藥用植物的水提物的抑菌狀況進行研究，發現其中３６種植物具有抗菌活性， 進一步對這些植物的抑菌譜進行實驗，發現其中的１２種如薑黃、灰楊柳、柚木等具有廣 譜的抑菌作用。Ｔ．Ｅｓｓａｗｉ〔５６】等對巴勒斯坦地區的１５種藥用植物進行研究，發現鼠尾草、 金石蠶、百裡香、小茴香等８種草藥對革蘭氏陰性菌、陽性菌都具有較強的抑菌作用。 香辛料是另一種有開發潛力的天然抑菌資源。丁香、肉豆蔻和胡椒等對多種微 生物有強烈的抑製作用，但大多用在食品方面，香辛料作為天然調味料，不但能夠 滿足消費者對食品添加劑安全性的要求，而且對於常見汙染菌如大腸桿菌、綠膿桿菌都 有較大的殺傷作用。當歸、甘椒、薄荷、肉桂等對常見的腐敗菌和致病菌也具有一定的 抑製效果。 第一章綜述目前，雖然已驗證了許多植物的提取物具有抑菌防腐作用，且有不少己作為天然防 腐劑開發利用並投放市場，但大部分都是以粗製品的形式出現，其有效成分到底是何種 物質還不甚清楚，更不用說分離出純品進行毒理學評價。另外，由於對防腐劑的研究僅 限於巨集觀的抗菌效果比較及在細胞和亞細胞水準上的顯微實驗觀察，無法定量地確定防 腐劑對菌體細胞的生化作用及其影響因素。所以，到目前為止仍不能對各種防腐劑的分 子結構特徵、分子性質參數與抗菌效果進行系統的定性定量分析，並就化妝品天然防腐 劑的設計、篩選、抗菌效果、抗菌機理預測等問題提出有效的解決方法。而且，天然防 腐劑在實際應用中也存在很多問題，如某些天然防腐劑用量少達不到防腐效果，用量多 可能影響化妝品的氣味和顏色，並且天然防腐劑普遍存在抗菌譜較窄的缺點等等。以上 這些都是製約天然防腐劑開發利用進程的主要因素。
３．２檀物抑菌活性物質的提取方法 固液浸提是用溶劑從固體原料中提取有效成分，浸提的原料多數是溶質與不溶性固體組成的體系，所用的溶劑必須具備與所提取得溶質互溶的特性。固液浸提所選用的溶 劑首先要能有選擇的溶解提取物質，這樣有利於後續的純化分離；其次，溶劑對溶質的 飽和溶解度要大，這樣可以得到高濃度的浸提液，若溶質在所選的溶劑中的溶解度小， 就需要消耗較多的溶劑，在進行溶劑回收時，需要消耗較多的能量；第三需要考慮溶劑 的物理性質，從溶劑回收的角度來看，沸點應該低一些，因為如果在常壓下進行操作， 沸點將成為浸取溫度的上限，而且粘度和密度對擴散係數、固液分離、攪拌的動力消耗 均有影響。另外，還必需考慮溶劑的價格、毒性、燃燒、爆炸、腐蝕性、對環境的汙染 等問題。若提取物應用於醫藥，化妝品和食品行業，則溶劑的無毒、無色、無味等是至 關重要的方面。
３．２．２微波提取 微波的快速高溫處理可以將細胞內的某些降解有效成分的酶類滅活，從而使有效成 分在藥材保存或提取期間不會遭受破壞。從細胞破壞的微觀角度看，微波加熱導致細胞 內的極性物質，尤其是水分子吸收微波能，產生大量的熱量，使細胞內溫度迅速上升， 液態水汽化產生的壓力將細胞膜和細胞壁衝破，形成微小的孔洞，從而利於生物活性成 分的提取。
３．２．３超聲波提取 利用超聲波產生的強烈振動、較高的加速度、強烈的空化效應、攪拌等特殊作用， 可以破壞植物細胞，使溶媒滲透到材料細胞中，促使待提取原料中的化學成分溶於溶媒 中，再通過分離提純得出所需的化學成分。在國外，超聲波法早已應用於生物活性成分 的提取。Ｖｅｒｏｎｉｃａ．Ｐ等從一種海洋沉積物中提取多環芳香烴，用超聲波提取３０ｒａｉｎ比 常規煎煮法提取３ｈ的提取率要高９％。 江南大學碩士學位論文３．２．４酶法提取 將纖維素酶、果膠酶等作用於藥用材料，可以使細胞壁及細胞間質中的纖維素、半 纖維素等物質降解，減小細胞壁、細胞間質等傳質屏障對有效成分向提取介質擴散的傳 質阻力，從而可以有效提高活性成分的提取率。
４桑葉的資源及其生物活性作用 ４．１桑葉的資源 桑葉異名鐵扇子。為桑科屬（ＭｏｒｕｓａｌｂａＬ．）的樹葉。葉互生；卵形或橢圓形，長 ５－１０ｃｍ，最長可達２０ｃｍ，寬５－１Ｉｏｎ，先端銳尖，基部心臟形或不對稱，邊緣有不整齊 的粗鋸齒或圓齒；葉柄長１．５－４ｃｍ；托葉披針形，早落。本屬植物全球約有１６種，分 佈於北溫帶、亞洲熱帶和非洲熱帶及美洲地區。我國約有１１種，分布於全國大部分地 區，以江蘇、浙江等南方養蠶地區產量較大。桑屬植物具有降血糖、降血壓、抗菌 和抗病毒等多種生物活性。現代藥理研究證明桑葉可抑製血糖升高，具有預防和治療 糖尿病的作用。
４．２桑葉的化學成分 （１）黃酮及黃酮苷類含有芸香苷、槲皮素、異槲皮苷、槲皮素３．三葡糖苷等化合物刪。 （２）甾類成分含有Ｂ．谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、Ｂ一谷甾醇Ｂ．Ｄ．葡糖苷、蚊麻脂醇、 內消旋肌醇、昆蟲變態激素牛膝甾酮和蛻皮甾酮。 （３）揮髮油成分含有乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸、異戊酸、己酸、異己酸、水 楊酸甲酯、愈創木酚、酚、鄰苯甲酚、間苯甲酚、丁香油酚等，還含草酸、延胡索酸、 酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、棕櫚酸、棕櫚酸乙酯、三十一烷、羥基香豆精。 （４）糖類含有蔗糖、果糖、葡萄糖腳ｌ。 （５）氨基酸類含有天門冬氨酸和谷氨酸等１７種氨基酸。降血壓物質Ｙ．氨基丁酸含量 高達２２６ｍｇ／１００９，令人注目，而Ｔ－氨基丁酸由谷氨酸轉化而來，桑葉中谷氨酸高達２３２３ ｍｇ／１００９（６７１。 （６）維生素類含有維生素Ａ、維生素Ｂ１、維生素Ｂ２、煙酸、維生素Ｃ、視黃醇、胡 蘿ｂ素及食物纖維等ｆ６４６６１。 （７）微量元素含有鋅、銅、硼、錳、鐵等多種微量元素咿』６６〕。 （８）生物鹼成分。
４．３桑葉的應用現狀 ４．３．１醫藥應用 桑葉的藥用首載於《神農本草經》，桑葉性味苦甘、寒，甘所以益血，寒所以涼血。 第一章綜述甘寒相合，故下氣而益陰，又能止咳，有補氣之功，是中醫清熱解毒之要葯。主治熱感冒、 肺熱燥咳、頭暈頭疼、目赤等症１６５１，臨床應用十分廣泛，常用桑葉入葯，組成復方中藥。 療效良好。桑全身是寶，桑葉、桑根、桑白皮、桑枝、桑皮汁、桑葉汁、桑椹均為藥用 抗應激、抗衰老的功能：桑葉中含有的ＳＯＤ、黃酮化合物具有清除自由基，增強機體抵抗力和抗衰老的作用。桑葉中豐富的ＶＢｌ有利於維持神經、心臟及消化系統正常 機能，可治療多發性神經炎、心臟活動失調、胃機能障礙；ＶＢ２有利於維持視網膜正常 機能，能治療角膜炎、唇損傷、脂溢性皮炎等；ｖｃ能增強微血管的緻密性，增加機體 對感染的抵抗力。桑葉中含有較多的葉酸，它參與核酸的合成，有抗各種貧血和促進 生長的作用，並能治療胃癌、腸胃管道障礙、食慾營養不良和瘡疹性皮炎等，對人體 健康意義重大。桑葉中含有的琥珀酸可使細胞活力正常化，不僅可以修復機體的損壞， 還有活化細胞的功能。 據研究，桑葉能提高小鼠對高溫刺激的耐受能力和防止由於應激刺激引起的大鼠 腎上腺皮質分泌功能低下，而當腎上腺功能低下時，桑葉可使之恢復正常。桑葉能延 長小鼠游泳及轉棒時間，具有增強肌體耐力作用。桑葉能延長果蠅的壽命，能提高老 年大鼠紅細胞內ＳＯＤ含量，從而能有效地清除生物氧化產生的超氧陰離子，並能降低 老年大鼠大腦、脊髓組織脂褐質含量，表明具有延緩衰老作用。 降血糖的作用嘲】：桑葉能降血糖主要是因為桑葉中含有一種獨有的生物鹼．Ｉ．脫氧 野尻酶素（ＤＮＪ），ＤＮＪ是Ｙ一種ａ．糖苷酶抑製劑，能阻礙ａ．糖苷酶５０％的活性，ＤＮＪ能同 小腸中的麥芽糖酶、蔗糖酶和乳糖等ａ．糖苷酶結合，且其之間親合力大於蔗糖與麥芽糖 等二糖與ａ．糖苷酶的親合力，於是大量的二糖不能進一步被吸收分解，從而降低血糖值。 要從根本上治療糖尿病，需要重新激活機體內胰島素的分泌。桑葉可促進胰島素Ｂ細胞 分泌胰島素，並降低胰島素分解速度，從而有利於糖尿病治療。據研究，糖尿病患者 體內血糖升高與自由基升高密切相關。桑葉中的黃酮類化合物不僅可以清除體內自由 基，還可清除酶類所不能清除的自由基，清除效果甚至強於抗壞血酸。 降血壓、降血脂、減肥以及預防心肌梗塞和腦溢血的作用：桑葉中的生物鹼可參 與糖脂代謝，有利於降血壓、血脂。桑葉中的蛻皮激素能促進細胞生長，能促進人體 蛋白質合成，排出體內膽固醇，降低血脂。桑葉中豐富的槲皮素等黃酮類化合物屬生 理活性物質，不僅可使血管收縮，使冠狀血管擴張，改善心肌循環，還具有抑製脂質 氧化，抑製膽固醇的吸收，有降血壓、防動脈硬化之功能。桑葉中豐富的ＧＡＢＡ，是神 經傳遞介質，並具有降血壓和抗動脈硬化的作用。 桑葉茶可以減肥與桑葉消腫、清血的作用有關。桑葉茶之所以能夠消腫，是因為 桑葉有利水的作用。清血是指將血液中過剩的中性脂肪和膽固醇排清，桑葉中的生物 鹼、蛻皮激素等功能性成分具有清血作用。桑葉中含有強化毛細血管、降低血液粘度 的黃酮類成分，所以在改善高脂血症與減肥的同時，又有預防心肌梗塞和腦溢血的作 江南大學碩士學位論文調整腸道功能與利尿防便秘功能：桑葉能行氣，改善腸功能。桑葉中含有大量的 有機成分，如草酸、酒石酸、琥珀酸、棕櫚酸等；另外在小腸未吸收而轉入的糖類， 由於大腸內菌叢的作用引起發酵，產生ＣＯ和Ｈ２並生成丁酸、丙酸、乳酸和乙酸等有機 酸。這些有機酸可使腸道內容物酸度增大，能抑製有害細菌的增殖。加上桑葉中所含 的ＤＮＪ、礦物質和食物纖維等成分的綜合作用，可使腹鳴、放屁、腹脹、糞便和便秘等 癥狀大為改善，同時也能增加體內水分的排出。 抗癌作用：桑葉中的維生素具有抑製變原效應，桑葉中的ＳＯＤ具有抗癌活性，桑 葉中的黃酮類化合物也有防癌的功能，桑葉內的桑素（Ｍｕｌｂｅｒｉｎ）具有抗癌活性，並有抑 製真菌的作用。 桑葉防治少白頭：近年研究證明，「少白頭」與體內酪氨酸酶不足有著密切的關係， 而銅則是合成酪氨酸酶的重要原料。桑葉中銅含量豐富，每ｌ克桑葉中約含銅 １．０２．２．２２ｕｇ。所以，用桑葉防治「少白頭」有較好的效果。取霜桑葉或鮮桑葉５００９，除去 梗莖，研末；另取黑芝麻２５０９，炒熟研末。二者加白糖調勻或製成大蜜丸，每日早晚 各服２０９，白天桑葉茶水送下。長期服用，可使白髮轉黑。
４．３．２食品應用 桑葉含有１７種氨基酸、多種生命必需的微量元素、維生素及食物纖維等功能性物 質，是一種天然、價廉物美的新型功能性食品的原剃６」。可以開發桑茶、桑露、桑汁、 桑晶等系列食品。桑葉資源要注重綜合開發利用，產品開發應由粗加工向提取、精製、 深加工轉化，以提高經濟效益。 桑茶粗蛋白中含有１７種氨基酸，其中１５種為人體所必需，營養豐富。桑茶略加咖啡 鹼，還能治傷風、失眠、頭痛、高血壓等。 色素桑葉經酒精抽提、濃縮、鹼化，得綠色色素，可用於化妝品和食品著色。 水提、醇提和微波醇提的桑葉提取物均有較強抗氧化作用，且這種抗氧化作用強 弱與提取物中總黃酮含量有一定正相關性。
４．３．３化妝品應用 消瘡祛斑作用：近年來的研究證明，桑葉有良好的皮膚美容作用，特別是對臉部的 痤瘡、褐色斑有比較好的療效。由於桑葉有清熱解毒的功效，可用桑葉來治療面部褐色 根據藥理研究證明，桑葉富含黃酮化合物、酚類、氨基酸、有機酸、胡蘿ｂ素、維生素及多種人體必需的微量元素，這對改善和調節皮膚組織的新陳代謝，特別是抑製色 素沉著的發生和發展均有積極作用。另外，堅持常飲還有減少皮膚或內臟中脂褐質（即 老年斑）的積滯。 桑葉茶的止汗作用：桑葉治汗出，由來已久。秦漢時期的《神農本革經》中記載： 「桑葉除寒熱、出汗」。被稱為金元四大家之一的名醫朱震亨（朱丹溪）在《丹溪心法》一 書中記載：「經霜桑葉研末，米飲服，止盜汗」。明末清初的名醫傅青主，很擅長用桑葉 ｌＯ 第一章綜述 止汗，他擬定有止汗神丹、遏汗丸、止汗定神丹等幾個藥方，都選用桑葉為主葯，並稱 贊桑葉為「收汗之妙品」。 用桑葉沐浴對美容大有裨益。研究表明經過霜雪洗禮的桑葉，解表且不傷裡，性 涼且滋潤，護膚而不脫脂。是很好的美容浴方，對皮膚粗糙的人是最佳選擇，經常沐 浴可以使皮膚變得光潔細嫩。 ５結論和立題依據 近年來，從植物中尋找和提取功能性物質，成為當前化妝品研究的熱點。「組分天 然化」、「回歸大自然」的呼聲成為世界化妝品工業的潮流。隨著我國加入ＷＴＯ，國產化 妝品與國外化妝品的競爭日益加劇，天然活性化妝品特別是中草藥化妝品是我國化妝 品取勝的法寶。而從銷售額和人均消費水準看，我國的天然化妝品有很大的發展太空 和潛力。 本人在定題之前研究比較了多種天然植物提取物的抑菌效果，比如竹葉、銀杏葉、 芭蕉葉、蘆葦葉、桑葉等，結果顯示桑葉的抑菌效果比較明顯，而且桑葉具有美白保 濕功效，作為化妝品的功能性添加劑很有開發利用的價值，所以最後選定研究桑葉的 抑菌活性。 縱觀前人關於桑葉提取物的抑菌作用的研究進展，發現存在以下幾個問題： （１）對桑葉提取物的抑菌效果僅用抑菌圈定性討論，沒有精確測定最低抑菌濃度的報 （２）對桑葉抗菌作用的物質基礎的研究未見詳細的報導。（３）對桑葉抑菌活性物質的最佳提取工藝和進一步分離純化條件沒有深入研究。 （４）桑葉提取物在化妝品中的應用未見詳細的報導。 基於以上問題，本試驗選取無錫中藥材店的乾桑葉為原料，通過Ｄ值計演算法快速、 精確的得出桑葉提取物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度；對於活性物的 提取得出了最佳的工藝條件，同時在抑菌活性的跟蹤下，進一步分離鑒定桑葉中的主 要抑菌活性成分。把桑葉提取物應用到化妝品中，對於它的防腐效果，美白保濕效果， 膏霜的穩定性作了研究，為桑葉資源在化妝品中的開發利用提供理論依據和技術支持。 江南大學碩士學位論文 第二章桑葉提取物的抑菌效果及最低抑菌濃度的研究 桑葉提取物具有抑菌效果，本試驗採用了擴散法和線性回歸法驗證了它的抑菌效 果，並採用Ｄ值計演算法快速、準確地得出它對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃 １．１試劑與儀器第一節桑葉提取物的抑菌效果評價 超凈工作台 上海儀器廠 ＳＰＸ．２５０型生化培養箱 上海躍進醫療器械廠 手提高壓蒸汽滅菌鍋 無錫第二醫療器械廠 精益移液器 無錫市醫療器械廠 數顯電子天平 上海天平儀器廠 ＨＨ．２型數顯恆溫水浴鍋 江蘇金壇榮華儀器製造有限公司 熱風乾燥箱 上海實驗儀器總廠 ｌｏ－２０１型旋轉蒸發儀 上海申順生物科技有限公司 ＪＦＳＤ．１００粉碎機 上海嘉定糧油儀器有限公司 索氏提取器（配套） 江南大學設備處 乾桑葉 無錫藥材店 桑葉水提取物 自製 桑葉醇提取物 自製 極美複合物 崑山市華新日用化學品有限公司 乙醇為分析純，實驗用水為去離子水。 極美複合物是雙咪唑烷基脲和碘丙炔基氨基甲酸丁酯的混和物。
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