乾貨—代謝組學送樣建議

代謝組學是在繼基因組學、轉錄組學及蛋白組學之後，發展起來的一門新學科，其主要是對生物體內小於1500的代謝物進行定性定量分析，並尋找代謝物與生理變化的相互作用關係。

基因組學和蛋白質組學分別從基因和蛋白質層面探尋生命的活動，而細胞內許多生命活動發生在代謝物層面，代謝物更多地反映了細胞所處的環境，這又與細胞的營養狀態，藥物和環境汙染物的作用，以及其它外界因素的影響等密切相關。因此就代謝組而言，其研究的的樣本類型廣泛，且含量很容易受到環境因素的影響。

推送樣本量

樣本處理及送樣建議

動物組織樣本

? 準確切除所需組織後，立即剔除結締組織和脂肪組織等非研究所需的組織類型。務必將組織分割成小塊；

? 在生理鹽水或PBS中迅速漂洗樣本，以去除血漬和汙物；

? 用鑷子夾住樣本，放入液氮中冷卻樣本15min；

? 用準備好的鋁箔或冷凍保存管裝載包裹組織，迅速投入液氮或轉入-80℃冰箱保存樣本；

? 動物組織的量為200mg/sample，保留備份，乾冰低溫寄送，避免反覆凍融。

植物組織樣本

（1）葉片、花、莖及根組織

? 採集植物葉片、花、莖、根組織後，用準備好的錫箔紙或冷凍保存管包裹樣本，迅速放入液氮中冷凍處理至少15min，迅速放入-80℃冰箱凍存。

? 採集葉片樣本時，最好在中午光照好的時間收集。

? 要根據實驗設計，採集樣本時保持樣本一致性，尤其是同一組樣本（顏色、衰老程度、葉脈佔比、光照、位置等）。

? 取整株植物的根部，要注意迅速用1×PBS漂洗掉根上的泥土，PBS漂洗時間盡量要快。

? 由於根部組織特別脆弱，被擠壓後會變成漿糊狀，所以推薦保存至離心管中，而不是錫箔紙包裹。

（2）果實、種子組織

? 對於含多汁、塊頭較大的果實（番茄、西瓜、蘋果等）需要先用鋒利的刀分割成「均勻」合適的小塊（≈200mg/sample）分裝至2mL離心管中，標號後迅速放入液氮中冷凍處理至少15min。

? 對於細小的顆粒種子（擬南芥種子、穀物種子等），可以先將同一組的植株種子混勻後再分裝（≈200mg/sample）至1.5mL離心管中。標號後迅速放入液氮中冷凍處理至少15min。

? 對於要求對整個果實進行提取的（整粒葡萄等），需要把果實裝在50mL離心管中/自封袋中，標號後（同時放入自封袋得標籤紙，註明樣本資訊）迅速放入液氮中冷凍處理至少15min。

? 對多汁的果實進行取樣很難保持均一性（如番茄，皮、果肉、果瓤、籽的佔比），強烈建議將整個果實進行研磨、凍乾，對粉末進行稱重分裝。

? 不推薦用錫箔紙包裹。

血液樣本

（1）血清樣本

? 血液收集在離心管中37℃（或室溫）靜置1h進行凝固分層。然後3000rpm室溫離心10分鐘，取上清轉至乾淨的離心管中。

? 再12000rpm 4℃離心10分鐘，取上清分裝到1.5mL離心管中，每管0.2ml，-80度凍存。

? 取血時如用酒精消毒，請擦乾擦拭部位，待酒精完全揮發後再取樣。

? 血清參考產率：30%~50%（例如：1mL全血大約能得0.3~0.5mL血清）。

? 采全血時如使用真空采血管，請務必使用無預加抗凝劑的凝血管（帽蓋為紅色）。

? 強烈推薦盡量多的收集樣本並分裝凍存（這樣可以用來做很多實驗，且避免反覆凍融）。

（2）血漿樣本

? 應使用肝素鈉抗凝管（真空采血管帽蓋為綠色）或EDTA抗凝管（真空采血管帽蓋為紫色）採集全血，並儘快進行血漿分離：3000rpm室溫離心10分鐘（血樣採集後室溫放置需在1h之內進行離心；

? 血樣採集後冰上放置需在2h內進行離心），取上層，0.2mL/管分裝至1.5mL離心管中。-80度凍存。

? 對於抗凝管的選擇：代謝組學實驗檢測推薦使用肝素鈉抗凝管（因為檸檬酸是TCA循環中的重要物質，使用檸檬酸鈉抗凝劑的話會引入外源汙染。而EDTA會影響NMR采譜。但肝素鈉會對RNA相關實驗有負面作用，主要是因為會抑製反轉錄酶活性。請根據自身具體情況選用合適的抗凝管）。

? 最後分裝保存推薦使用1.5mL離心管，因為螺口凍存管管帽內有一個橡膠墊圈，目的是為了密封。但是長期在-80℃/乾冰低溫下，橡膠圈會變硬脆，易脫落，導緻密封不嚴，樣本洩露。

? 血漿參考產率：≈50%（例如：1mL全血大約能得0.5mL血漿）。

尿液樣本

（1）懸浮細胞

? 甲醇溶液（60%v/v）與0.85%(wt/vol)AMBIC溶液（pH7.4）混合液，預冷；

? 對細胞計數，計算一次實驗需要的用量（即1體積）；

? 取5體積的淬滅試劑於試管中（試管的體積應為大於等於7體積），置於-20℃預冷；4．快速從細胞培養液中取出1體積的細胞，放入含有淬滅試劑的試管中；

? 輕微震蕩試管10s，在1000g，4℃下離心1min，若細胞未沉澱，則延長離心時間；

? 除去上清；

? 將細胞放入液氮，30s後取出置於-80℃保存。

（2）貼壁細胞

? 將5體積的淬滅試劑加入到離心管中，預冷（離心管體積應大於等於7體積）；

? 除去細胞培養基，迅速用預冷的1XPBS溶液清洗細胞，清洗兩次；

? 離心除去PBS溶液（一定要將PBS去除乾淨，越快越好）；

? 消化：加入胰酶，消化至部分細胞呈球狀；然後加入培養基，輕輕晃動，使培養基浸潤細胞終止消化，吸出剩餘培養基；加入PBS吹打，懸浮細胞；（目的是把貼壁細胞消化下來，方便後繼處理，加入的溶液量及孵育時間可以根據自己實驗室具體情況進行修改）；

? 快速計數，取1體積的細胞；

? 快速放入預冷的淬滅試劑中，輕微震蕩離心管10s；

? 轉子-20℃預冷,在4℃，2500g條件下離心5min；

? 除去上清，將細胞放入液氮中，10s後取出保存在-80℃中。

糞便、腸道內容物樣本

? 首先配製濃度為100mg/mL的疊氮化鈉（用雙蒸水溶解），待新鮮糞便或腸道內容物樣本收集好後，按照2μL/g樣本的比例添加疊氮化鈉，混勻後分裝樣本至200mg/管，然後立即用液氮速凍處理15min，保存至-80℃冰箱。

? 由於糞便/腸道內容物中有非常多的微生物，微生物代謝速度非常快，所以反覆凍融會對代謝水準有非常大影響。強烈建議樣本收集後，按照200mg/sample進行分裝凍存。

? 疊氮化鈉的作用是防腐殺菌，有毒，請萬分小心。

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