2021年美國肝病研究年會（AASLD2021），研究人員帶來了一種基因編輯技術開發慢B肝新藥的研究進展。2020年，兩位科學家因發明CRISPR/Cas9技術斬獲諾貝爾化學獎，該技術應用於慢B肝前景主要是在直接靶向cccDNA有一定吸引力。
B肝CRISPR/Cas9靶向性，結合抑製DNA修複機制，可顯著增強抗病毒
一、研究背景
研究人員介紹，目前抗B肝病毒（HBV）療法對共價閉合環狀DNA（cccDNA）幾乎沒有影響。B肝病毒能夠使用宿主DNA修複機制，從而進行cccDNA生物合成。我們研究了CRISPR/Cas9技術靶向HBV基因組與抑製DNA修複機制相結合的功效。
二、研究方法
我們設計了靶向HBV基因組的gRNA（HBV-gRNA）和不靶向HBV或人類基因組的對照gRNA（Cont-gRNA)。19天B肝病毒感染後，將串聯 Cas9 和 HBV-gRNA（或 Cont-gRNA）表達載體（HBV-gRNA/Cas9 或 Cont-gRNA/Cas9）慢病毒轉導到 HBV 基因組整合細胞（HepG2.2.15）或原代人肝細胞（PHH）中。
具有可誘導 Cas9 表達的 HBV 易感細胞 (HepG2-hNTCP-iCas9) ，使用單個HBV-gRNA 或 Cont-gRNA 載體進行慢病毒轉導。當HBV 感染後 4 天，Cas9 表達由多西環素 (DOX) 給藥誘導。我們檢查了 CRISPR/Cas9 處理在有或沒有 小干擾RNA（siRNA）抑製DNA修複機制的情況下的抗病毒反應。
三、研究數據
結果表明，Surveyor 檢測顯示，HBV-gRNA/Cas9 的慢病毒轉導誘導了HepG2.2.15 細胞中 HBV-gRNA 靶向的 HBV 基因組區域的插入缺失形成。和Cont-gRNA/Cas9 相比，HBV-gRNA/Cas9轉導可顯著降低HepG2.2.15 細胞上清液中HBVDNA和HBs抗原的水準以及細胞內前基因組RNA（pgRNA）的水準！
同樣，HBV-gRNA/Cas9轉導也降低了上清液中HBVDNA和HBs抗原的水準，以及PHHs 中細胞內pgRNA和cccDNA的水準。下一代測序顯示，HBV-gRNA 轉導和 DOX 誘導的 Cas9 表達，誘導了 HepG2-hNTCP-iCas9 細胞中 HBV-gRNA 靶向的 HBV 基因組區域的插入缺失形成。
HBV-gRNA 轉導，還能夠降低上清液中HBVDNA和HBs抗原的水準，以及HepG2-hNTCP-iCas9 細胞中細胞內 pgRNA 和 cccDNA 的水準。抑製 BRCA 對同源重組至關重要，但並不會改變 CRISPR/Cas9 處理在 HepG2-hNTCP-iCas9 細胞中的功效。
而抑製PARP2或HPF1，對於DNA修複雙鏈斷裂的初始步驟很重要，或LIG4對非同源末端連接 (NHEJ) 也至關重要，它顯著增強了CRISPR/Cas9治療的抗病毒作用。
四、研究結論與開發前景
本研究人員給出的結論是，通過抑製非同源末端連接 (NHEJ) 介導的DNA修複機制，可以增強針對HBV基因組的基因編輯CRISPR/Cas9療法功效。
小番健康結語：這是2021年美肝會上，介紹的一項新型HBV療法，研究人員使用了CRISPR/Cas9技術來靶向B肝病毒的基因組，這種新方法可以通過抑製NHEJ介導的DNA修複，從而增強CRISPR/Cas9療法功效。這項開發技術問世不算久，它還有很漫長的研究之路要走，但CRISPR/Cas9也是目前全球已知的被科學家發現，具有潛在直接靶向B肝病毒複製模板cccDNA的方法！返回搜狐，查看更多
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