人肝細胞體外長期培養突破瓶頸 「5C」可支持B肝及C肝病毒複製

近日，《科學》雜誌發表復旦大學基礎醫學院袁正宏研究組與北京大學鄧宏魁研究組、解放軍總醫院盧實春研究組合作的一篇研究論文，其利用化學小分子調控細胞信號通路，實現功能肝細胞在體外的長期維持，並證實此肝細胞在體外支持乙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒的長期持續感染，該成果為大量製備功能成熟肝細胞提供了可能。

如何誘導獲得功能成熟的細胞並在體外保持其功能性一直是再生醫學的國際難題。研究人員以體外培養過程中快速失去功能的人原代肝細胞為對象，首先發現與在體外培養24小時的細胞的轉錄譜差別、顯著變化等，找到5種關鍵的化學小分子(FSK、SB43、DAPT、IWP2和LDN193189)，將其稱為「5C」。之後，研究人員利用「5C」在體外成功實現了肝細胞功能的長期維持。這種方法相比於傳統遺傳學方法，可實現對多個信號通路靶點的精細調控。在一個月以上的培養過程中，該方法成功抑製了肝細胞的去分化，細胞整體表達譜與體內的肝細胞高度相似，並可長期維持白蛋白分泌、尿素合成、藥物代謝等肝細胞的功能。

更重要的是，實驗證明，「5C」培養的原代肝細胞可支持B肝病毒及C肝病毒的複製。在長達30天的感染過程中，B肝表面抗原、e抗原、B肝病毒DNA等指標明顯優於目前常用的培養條件，尤其是能夠長期穩定產生B肝病毒複製必需的共價閉合環狀DNA，而這種DNA的產生正是目前B肝病毒難以被清除，疾病難以被治癒的關鍵。在C肝病毒感染方面，「5C」培養的原代肝細胞中也檢測到了C肝病毒有效複製的信號，其在普通原代肝細胞培養條件下是檢測不到的。（記者 孫國根）