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盧特康通過抑製比較蛋白質組學研究揭示的表達抑製結直腸癌細胞上

盧特康通過抑製比較蛋白質組學研究揭示的CREB1表達抑製結直腸癌細胞上皮 - 間充質轉變。

環AMP(cAMP)反應元件結合蛋白1(CREB1)是癌症治療的有希望的靶標。在這裡,我們報告,盧特康,一種天然產物,抑製轉錄水準CREB1的表達,並阻止上皮細胞間質轉換(EMT)的結直腸癌細胞。用盧特康處理大腸癌細胞,誘導間質細胞向上皮細胞轉化,減少間充質標記物的表達,並抑製體外細胞遷移。通過比較HCT-116細胞蛋白質組學和有和沒有盧特康處理,我們確定了366差異表達的蛋白質。生物資訊學分析顯示CREB1的下調在這個過程中起著核心作用。免疫印跡分析證實盧特康處理的細胞中CREB1及其下遊靶基因的蛋白質水準降低。此外,CREB1的強製性表達消除了盧特康對結直腸癌細胞的抑製作用,表明CREB1在此過程中的重要作用。此外,螢光素酶報告基因檢測和CREB1半衰期的檢測抑製了放線菌酮(CHX)對新蛋白的合成,結果表明盧特康在轉錄水準抑製CREB1的表達。綜上所述,我們的研究結果表明,抑製CREB1的表達對盧特康抑製結直腸癌細胞EMT的作用機制至關重要。毫無疑問,在分子水準上了解天然產物的作用機制是對於他們的翻譯應用是重要的。蛋白質組學是探索天然產物對細胞影響的強大平台。在這項研究中,我們比較了有和沒有盧特康處理的HCT-116結直腸癌細胞的蛋白質組學圖譜,以研究盧特康對結直腸癌細胞的作用機制。隨後的生物資訊學分析顯示,CREB1可能是盧特康對結直腸癌細胞的主要靶點之一。通過盧特康下調CREB1影響胰高血糖素信號傳導途徑和cAMP信號傳導途徑。蛋白質組學研究結果通過機理分析進行驗證。我們首先發現盧特康降低了CREB1及其下遊靶基因的mRNA和蛋白水準。然後我們發現盧特康通過實時PCR和螢光素酶報告基因測定法在轉錄水準上抑製CREB1的表達,這通過用放線菌酮(CHX)抑製新蛋白質合成後檢測CREB1的半衰期來證實。最後,我們構建了過表達CREB1的穩定細胞株,結果表明CREB1的異位表達抑製了盧特康對結直腸癌細胞的抑製作用,並且恢復了CREB1靶基因在結直腸癌細胞中的表達水準,從而證實了CREB1在結直腸癌細胞中的關鍵作用盧特康對結直腸癌的作用機制。總之,我們通過蛋白質組學發現和機理分析的結合,揭示了盧特康對結直腸癌細胞的作用機制。

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